style="width:11.32658in;height:7.99986in" /> 本文是学习GB-T 33121-2016 玉米褐条霜霉病菌检疫鉴定方法. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了玉米褐条霜霉病菌(Sclerophthora rayssiae Kenneth,Kaltin et
Wahl var.ceae Payak
et
Renfro)的形态学检疫鉴定方法，明确了样品现场采集、实验室鉴定、标本制作和样品保存等方法。
本标准适用于玉米(Zea
mays)植株及其谷物中的玉米褐条霜霉病菌的检疫和鉴定。
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 18085—2000 植物检疫 小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法
GB/T 18086—2000 植物检疫 烟霜霉病菌检疫鉴定方法
SN/T 1157 进出境植物苗木检疫规程
SN/T 2122 进出境植物及植物产品检疫抽样方法
SN/T 2504 进出口粮谷检验检疫操作规程
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
孢子囊 sporangium
孢囊梗顶端膨大，并在下方生出横隔与菌丝分开形成囊状结构的无性繁殖器官。
注1:成熟后易脱落，并在囊内形成游动孢子。
注2:孢子囊的英文复数形式为"sporangia"。
3.2
孢囊梗 sporangiophore
支持孢子囊的菌丝分枝。
3.3
藏卵器和雄器 oogonium& antheridium
生殖菌丝生出两个大小不同的异形配子囊，大的为雌配子囊，能在囊内形成一个雌配子(卵子),即
为藏卵器；小的能产生雄配子，即为雄器。
注 1 : 玉米褐条霜霉病菌的藏卵器与雄器同体。
注2:藏卵器与雄器的英文复数形式分别为"oogonia""antheridia"。
3.4
卵孢子 oospore
藏卵器中的卵子与雄器的雄配子相配合后形成。
中文名：玉米褐条霜霉病菌，又称褐条指疫霉菌玉蜀黍变种。
GB/T 33121—2016
英文名：Brown stripe downy mildew of corn,简称 BSDM。
学名：Sclerophthora rayssiae Kenneth,Kaltin et Wahl var.zeae Payak et
Renfro,1967。
分类地位：藻菌界Chromista,卵菌门 Oomycota, 卵菌纲 Oomycetes, 霜霉目
Peronosporales,霜霉 科 Peronosporaceae,指疫霉属 Sclerophthora
Thirumalachar,Shaw &.Narasimhan,1953,褐条指疫霉
菌 Sclerophthora rayssiae Kenneth,Koltin et Wahl,1964。
传播途径：该病菌可以由被病原菌污染过的种子，或带病植株，以及混杂于货物中的病残体作远距
离传播。
玉米褐条霜霉病菌的其他信息参见附录 A。
本标准主要以玉米褐条霜霉病菌的为害症状，病原菌的孢囊梗、孢子囊和卵孢子形态特征为鉴定依
据。玉米褐条霜霉病菌的为害症状参见附录 B 和附录C,
病原菌的孢子囊和卵孢子形态特征见附录D。
生物显微镜(配带100倍油镜且最大观察倍数不低于1000倍，配备图像采集系统和图像分析软
件，或至少配带照相功能和镜台测微尺)、体视显微镜(总放大倍数不低于50倍)、超净工作台、振荡器、
高压灭菌锅。
医用解剖刀、解剖针、眼科手术剪刀、胶头滴管、微量可调加样器(2μL～20μL)、
枪头(2μL~ 20μL)、滤筛(孔径为0.18 mm)、 烧杯(250 mL)、 离心管(10 mL 或20
mL)、 三角瓶(500 mL)、 培养皿
(直径为150 mm～200 mm)。
无菌水、75%乙醇溶液、吐温20、10%氢氧化钠、席尔氏缓冲液(配制方法按 GB/T
18085—2000 执
行)和0.05%苯胺蓝(棉蓝)乳酚油(配制方法按GB/T 18086—2000执行)。
无菌滤纸、铝箔纸、Parafilm 膜、载玻片和盖玻片。
7.1.1.1 植株症状检查
现场对玉米植株的检疫，要在光线充足处，仔细检查植株叶片是否带有可疑症状，参见附录
B 和附
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录C。
7.1.1.2 种子和原粮的检疫
现场对玉米种子和原粮的检疫，要在检疫的现场仔细检查种子或原粮中是否夹带有可疑症状叶片
及其他病残体，参见附录 B 和附录 C。
对于植株样品的扦取，主要按照SN/T1157
执行；对于种子样品的扦取，主要按照 SN/T 2122 执
行；对于原粮样品的扦取，主要按照SN/T 2504 执行。
将现场检疫获取的抽取样品，连同现场发现的病残体，送实验室作进一步的室内检疫及玉米褐条霜
霉病病原鉴定。
对于现场送检的带有可疑症状病叶或病残体，置于体视显微镜下观察，用解剖针挑取叶片病斑背面
上的霉状物，放在加有1滴约10μL
席尔氏缓冲液的载玻片上，盖上盖玻片，先在显微镜下用40倍物镜
观察有无病菌的孢囊梗、孢子囊，再用100倍油镜记录其形态特征，测量其大小，并拍照留存。
对于未带有可疑症状的病叶或病残体，用流水充分冲洗，用75%乙醇溶液浸泡1 min
进行表面灭
菌，无菌水冲洗3次，置于灭菌的培养皿(垫有充分吸取无菌水的三层无菌滤纸)中，用Parafilm
膜封口
后，置于21℃培养箱中，在相对湿度100%、黑暗条件下保湿培养过夜，诱发孢子囊产生后，按7.2.1方
法镜检观察、测量和病原鉴定。
对于病斑上霉状物稀少的老病叶，用眼科手术剪刀剪成约10 mm×10
mm,置于小烧杯中，加适量
10%氢氧化钾溶液，煮沸5 min～10 min
至叶组织透明，平整放入用胶头滴管加上1滴0.05%苯胺蓝
(棉蓝)乳酚油作浮载剂的载玻片上，置于显微镜下，用40倍物镜或20倍物镜逐片观察有无卵孢子。如
发现有卵孢子，用100倍油镜记录其形态特征，测量其大小，并拍照留存。
对于玉米种子和原粮，每份样品充分混匀后，随机取100g 置于500 mL
三角瓶内，加入适量蒸馏水 (约150 mL)
浸软后，再用胶头滴管加入1滴～2滴吐温20,用铝箔纸将三角瓶口封住，用振荡器激烈振
荡 5 min,将洗涤液经滤筛过滤到烧杯后，倒进离心管，以转速1000 r/min 离心5
min,必要时可重复离
心1次，将上层清液全部倒去，最后用胶头滴管加入数滴席尔氏缓冲液至沉淀液充分混匀，再用微量可
调加样器吸取15μL
沉淀液置载玻片上，盖上盖玻片，按7.2.1方法镜检观察有无玉米褐条霜霉病菌的
孢子囊，每份样品洗涤液至少检查20个玻片。在镜检时，如发现孢子囊干瘪变形，将镜检玻片封固后，
连同沉淀液放置于5℃的冰箱中过夜，等孢子囊形态恢复后，继续按7.2.1方法镜检观察和测量。
GB/T 33121—2016
玉米褐条霜霉病菌鉴定特征：孢囊梗短小，小于5μm,
由气孔下的菌丝伸出，能形成2个～6个孢
子囊；孢子囊无色，卵圆至圆柱形，顶部有镜片状孔口，脱落，有一小柄，大小(29μm～66.5μm)×
(18.5μm～26μm);
孢子囊萌发时产生4个～8个透明、球形的游动孢子，直径7.5μm～11μm。 藏 卵
器分散产生在叶肉中，近球形，壁薄，无色至淡黄色，直径33μm～44.5μm,
每个藏卵器附有1个～2个
侧生的雄器；卵孢子中等大小，球形至近球形，光滑而发亮，与藏卵器壁愈合，直径29.5μm～37μm。
玉米褐条霜霉病菌形态特征图见附录D。
经实验室的进一步检疫和病原观察、测量，如果检出的病原菌孢囊梗、孢子囊和卵孢子形态特征与
鉴定特征相符，则检出的病原菌可鉴定为玉米褐条霜霉病菌，样品判定为阳性样品。
样品经登记和经手人签字后妥善保存。对检出玉米褐条霜霉病菌的种子或原粮样品，应保存于
4℃的冰箱中，或存放于具防虫、防鼠、防霉变和防污染的环境中真空密封保存，保存期约6个月，以备
复核；另外，对检出病菌的玉米植株或病残体，要制作成干标本(制作方法参见附录
E),可长期保存。
以上样品保存期满后，除少量有必要作长久保存的样品外，其余须经高压灭菌后方可作弃置处理。
完整的实验记录包括：样品的来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法、结果、症状和病菌显微照片
等，并有实验人员和审核人员签字。
GB/T 33121—2016
(资料性附录)
玉米褐条霜霉病菌的相关信息
A.1 地理分布
主要分布在亚洲的印度大部分地区(北部的比哈尔邦、北方邦、德里，西部的古吉拉特邦、拉贾斯坦
邦，西北部的哈里亚纳邦、喜马偕尔邦、查谟和克什米尔、旁遮普邦，西南部的卡纳塔克邦，中部的中央
邦，东北部的梅加拉亚邦，东南部安得拉邦，东部的西孟加拉邦，以及锡金)、巴基斯坦、尼泊尔、缅甸、
泰国。
该病在我国无分布，但分布区与我国广泛接壤。
A.2 寄主范围
玉米褐条霜霉病菌的主要寄主是玉米(Zea
mays),该病菌也能危害马唐草(Digitaria sanguina-
lis)。
A.3 生物学和生态学
玉米褐条霜霉病是唯一一种诱发局部症状的玉米霜霉病。病菌可以卵孢子的形态在土壤病残体中
或在野生马唐草内越冬，在土壤病残中至少存活3年，抗逆性强；卵孢子在春季萌发产生孢子囊，并释放
出游动孢子，成为主要的初浸染来源，游动孢子依靠风雨传播，玉米出苗后1个月左右最易感病。孢子
囊一般在20℃~22℃产生，孢子囊的形成与侵染需要12 h～96h
的水膜，游动孢子萌发的温度范围为
15℃~30℃,最适温度在22℃~25℃;卵孢子则在较高的温度下形成。土壤温度在28℃~32℃时，
该病害极易流行。
病害发生与流行显著受降雨及温湿度影响，在受害最严重的印度，年雨量在1000
mm～2000 mm
地区发病最重，年雨量在600mm～1000mm 地区中等发病，年雨量在400
mm～600mm 地区发病轻。
虽是一种局部侵染的病害，但该病在印度造成玉米生产轻者损失20%以上，重者损失70%以上。
A.4 病原菌传播途径
该病菌可以由被病原菌污染过的种子，或带病植株，以及混杂于货物中的病残体作远距离传播。
A.5 该病菌与其所在属其他种的关系
指疫霉属是因大孢指疫霉菌，即玉米疯顶病菌的无性阶段似疫霉，有性阶段似指梗霉，于1953年由
Thirumalachor、Shaw 和
Narasihan将其从指梗霉属(Sclerospora)中的大孢指梗霉菌(S.macrospore
Saccardo,1890)独立出来成为1个新的属，指疫霉属(Sclerophthora),大孢指疫霉菌[S.macrospore
(Sacc)Thirumalachar,Shaw et
Narasimsha,1953]亦成为该属的模式种。目前该属迄今已知4种：大
孢指疫霉菌[S.macrospore(Sacc)Thirumalachar,Shaw et
Narasimsha]、喜冷指疫霉菌(S.cryophila
Jones)、黑麦草指疫霉菌(S.lolii Kenneth)和褐条指疫霉菌(S.rayssiae
Kenneth,Kaltin et Wahl),均寄
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生于禾本科(Gramineae)植物，引起霜霉病。其中褐条指疫霉菌出现2个变种，Payak
等(1970)认为褐 条指疫霉菌原变种(S.rayssiae var.rayssiae Kenneth,Koltin
et Wahl,1964)不危害玉米，而褐条指疫霉
菌玉蜀黍变种，即玉米褐条霜霉病菌(S.rayssiae Kenneth,Kaltin et Wahl
var.xeae Payak et Renfro,
1967)主要侵染玉米。
该属分类检索表如下：
孢子囊柠檬形
卵孢子大，直径42μm～75μm,多产生在维管束周围
孢子囊(60μm～100μm)×(43μm～64 μm) ……………………………………………………… S.macruspora
卵孢子中等，直径在29.5μm～44μm之间，分散产生在叶肉中
孢子囊(29μm～66.5 μm)×(18.5μm～26 μm) …………………………………………
S.rayssiaevar.ceae
孢子囊(29μm～55μm)×(19μm～28μm) …………………………………………… S.rayssiaevar.rayssiae
卵孢子小，直径25μm～29μm,分散产生在叶肉中
孢子囊(41μm～55μm)×(25μm～35 μm) ……………………………………………………………… S.lolii
孢子囊倒梨形
卵孢子大小差异大，直径20μm～37.5μm,分散产生在叶肉中
孢子囊(22.5μm～45.5μm)×(11.5μm～22.5μm) ……………………………………………… S.cryophila
以上检索表中的前两种：大孢指疫霉菌(S.macrospore)和褐条指疫霉菌玉蜀黍变种(S,rayssiae
var.ceae)主要侵染玉米，后3种菌在以色列、英国、加拿大、印度侵染大麦、黑麦草、鸭茅等，不侵染
玉米。
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(资料性附录)
玉米褐条霜霉病菌的为害症状
发病初期，植株叶片病斑狭长，颜色为黄色或褪绿色，长度不等，宽为3
mm～7mm。 随病情加重，
受叶脉限制，病斑边缘明显，随后病斑变红紫色，使病叶似日灼状。在空气相对湿度大时，病斑背面密布
淡灰色霜霉状物，即病菌的孢囊梗与孢子囊。苗期发病，植株因叶片受害造成矮缩，节间缩短，但病株不
畸形，病苗受害严重时死亡，造成田间缺苗断垄；抽花时发病，会使籽粒发育受阻，种子不饱满，重者植株
提前死亡。
病菌为害症状照片见图 B.1。
style="width:11.32658in;height:7.99986in" />
说明：
A—— 植株叶片症状；
B—— 田间发病情况。
图 B.1 玉米褐条霜霉病菌为害症状(仿 CABICPC,2011)
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(资料性附录)
玉米褐条霜霉病菌与玉米疯顶病菌(S.macrospore) 的主要区别
玉米褐条霜霉病菌与玉米疯顶病菌的主要区别见表C.1。
表 C.1 玉米褐条霜霉病菌与玉米疯顶病菌的主要区别
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GB/T 33121—2016
style="width:11.66658in;height:5.36008in" />
说明：
A—— 玉米褐条霜霉病菌的为害症状；
B—— 玉米疯顶病菌的为害症状。
图 C.1 玉米褐条霜霉病菌与玉米疯顶病菌在为害症状上的区别(仿
CABI CPC,2011)
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(规范性附录)
玉米褐条霜霉病菌的形态特征图
玉米褐条霜霉病菌的形态特征图见图 D.1。
style="width:11.80661in;height:12.48686in" />
说明：
A— 孢囊梗短小，正在从由气孔下的菌丝伸出(1 bar=10μm);
B—— 孢子囊正在从孢囊梗顶端形成(1 bar=10μm);
C— 孢子囊形态(1 bar=10μm);
D— 分散产生在叶片组织中的藏卵器(1 bar=30μm);
E— 卵孢子形态(1bar=30μm)。
图 D.1 玉米褐条霜霉病菌形态特征(仿 CABICPC,2011)
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(资料性附录)
干标本的制作
干标本采用分层叠压，用标本夹制作。每层将染病的植株、叶片或病残体，放在两层用于制作植物
标本的专用吸水纸(每层厚3张～4张)中间(不重叠),如有必要，用镊子纠正植株、叶片或病残体在纸
上的姿态；叠放整齐压在标本夹中。每个标本夹的总厚度以不超过4 cm
为宜，并根据温湿度情况，以保
证标本不变色发霉为前提，及时更换标本纸。可自然干燥，也可采用烘箱快速干燥；烘箱快速干燥时烘
箱温度以控制在45℃±3℃为宜，采用快速烘干法，换标本纸间隔时间应不超过2 h。
直到标本含水量
在20%～30%为宜。
干标本可置于垫有棉絮和樟脑丸的标本盒中进行保存。
GB/T 33121—2016
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